病毒DNA/RNA提取试剂盒
- 产品品牌：???凯杰
- 产品货号：???
- 产品规格：???250T/盒
- 检测方法：???
病毒DNA/RNA提取试剂盒
QIAampR UltraSensTM Virus Handbook
广州健仑生物科技有限公司
（用于从1ml悬液样品中高效纯化可滤性病毒RNA或DNA）
1 试剂盒（250份）
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纯化柱 |
250 |
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接收管 2ml |
750 |
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AC 缓冲液 |
230 ml |
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AR* 缓冲液 |
90 ml |
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AB 缓冲液(浓缩) |
22 ml |
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AW1* 缓冲液(浓缩) |
95 ml |
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AW2* 缓冲液(浓缩) |
66 ml |
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AVE 缓冲液 |
10×2 ml |
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蛋白酶K |
6 ml |
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Carrier RNA |
5×310 μg |
2 保存
2.1 纯化柱室温保存（15—25 ℃，以下室温保存均指该温度），保质期12个月
2.2干粉状Carrier RNA 可室温保存1年；而溶于AVE缓冲液时需要等分，可于-20℃保存1年
2.3 蛋白酶溶液可室温保存1年，但于2—8℃环境下可延长保存期
3 安全
3.1 衣着：合适的实验室外套、一次性医用手套、护目镜
3.2 注意事项
3.2.1 勿将漂白剂或酸溶液直接加入样品准备废液中，当AR缓冲液和AW1缓冲液含有的胍氢可酮和漂白剂结合时会产生高敏性的有害混合物
3.2.2 缓冲液AC、AB、AR、AW1和蛋白酶K均具潜在危险性，操作时需认真谨慎
3.2.3 所有实验步骤均需在室温（15—25℃）下进行；样品液可于2—8℃下保存6小时，在-20℃或-80℃下保存更长时间；同时，样品需先用内部控制物处理，以防核酸酶降解
3.2.4 纯化柱（防交叉污染）
3.2.4.1 加入样品液时勿弄湿柱子边缘
3.2.4.2 注意更换有屏障的无核酸酶枪头
3.2.4.3 防止用枪头触碰柱膜
3.2.4.4 稍离心除去盖上液滴
4、设备与试剂
4.1 乙醇（96—100%）
4.2 无菌、无核酸酶、有屏蔽的枪头
4.3 无核酸酶离心管（1.5ml和2ml）
4.4 一次性无粉手套
4.5 磷酸盐缓冲液（PBS,当样品样不足1ml时）
4.6 可调速微型离心机（250—1200×g）
4.7 振摇孵育器，可加热
4.8试剂准备
4.8.1 Carrier RNA
每管加入310μl缓冲液AVE，制成1μg/μl 溶液，-20℃保存（冻融不能超过3次），每样品最优Carrier RNA量为5.6μg
4.8.2 缓冲液AB
加入标明的乙醇体积（96—100%），翻转10次，使得溶液均质，室温保存
4.8.3 缓冲液AW1*
加入瓶上标明的乙醇体积（96—100%），室温保存
4.8.4 缓冲液AW2*
加入瓶上标明的乙醇体积（96—100%），室温保存
5、流程
5.1 1ml处理液
5.2 细胞溶解，目标物沉淀于缓冲液AC中
5.3 在缓冲液AR中重新悬浮，并用蛋白酶K除去蛋白
5.4 加入缓冲液AB，连接，清洗2遍，洗提获得RNA或DNA
6、实验操作步骤
6.1 准备
6.1.1 使样品液温度平衡至室温（15—25℃）
6.1.2 校核缓冲液AB、AW1、AW2、Carrier RNA等
6.1.3 使AR缓冲液温度平衡至60℃（水浴锅）
6.1.4 所有离心操作需在室温下进行
6.2 吸取1ml 样液至2ml 离心管中（管盖上不能有液体粘附，防污染）
若不足1ml，需用磷酸盐缓冲液补足，但样液体积应不少于200μl
6.3 吸取0.8ml 缓冲液AC至样液表面；吸取5.6μl Carrier RNA液体至管盖（6.1μl mix）勿将缓冲液AC和Carrier RNA事先混合，且需加入内部控制物，同时推荐与Carrier RNA混合加入（0.5μl + 5.6μl Carrier RNA），即6.1μl mix
6.4 盖上盖子，上下翻转3次，涡旋10秒
6.5 室温孵育10分钟（最多15分钟，不能更久）
6.6 离心3分钟（1200×g），移除表面液体，收集沉淀（轻弹使沉淀松散，确保盖上无碎物）
6.7 移入300μl 预热至60℃的缓冲液AR和20μl 蛋白酶K
为了减少移液步骤，可将缓冲液与蛋白酶K混合，若10份，即3.3ml预热缓冲液AR和220μl蛋白酶（多10%），漩涡10秒混合后，分装320μl至每管
6.8漩涡至微粒完全重新悬浮
每次漩涡两管（5—10秒），后漩涡另两管，反复循环3—5次（或更多），有助于蛋白消化
6.9 在振摇孵育器上孵育10分钟，40℃，最高混匀速度
10分钟已足够长，不允许延长时间
6.10 稍离心，除去盖上液滴
6.11 移入300μl 缓冲液AB，漩涡混匀，稍离心
6.12 小心移取700μl溶解物至纯化柱（装在一2ml收集管上），勿弄湿边缘，盖上盖子，离心1分钟（3000—5000×g）
6.13 将纯化柱装在新的2ml收集管上（试剂盒中提供），遗弃旧收集管；小心打开纯化柱盖子，移入500μl缓冲液AW1；离心1分钟（6000×g）
6.14 将纯化柱装在新的2ml收集管上（试剂盒中提供），遗弃旧收集管；小心打开纯化柱盖子，移入500μl缓冲液AW2；最高速离心3分钟（20,000×g）
为防止离心减速震动导致的滤液黏着在纯化柱上，可额外取一新2ml收集管套上纯化柱，最高速离心1min
6.15将纯化柱装在新的1.5ml收集管上（非试剂盒中提供）遗弃旧收集管；小心打开纯化柱盖子，移入30μl缓冲液AVE至纯化柱膜上（全部弄湿），离心1分钟（6000×g）
6.16 重复步骤6.15，当需更多体积时，可适当增加AVE体积，而非提取后稀释
6.17 RNA保存，-80℃
备注：初步计算，整个实验过程共需约2—3小时
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